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细胞传代
细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml pbs清洗2次。加入3ml含0.25%edta的胰蛋白酶,人ips细胞相关,放人细胞培养箱3min。加人1ml dmem完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。
加入10ml pbs清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmx2min,弃上清液。再加入10ml pbs(经高压灭菌,保存于40c),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%co2的细胞培养箱继续培养。
ips细胞这一名词,全称为诱导性多能ips(induced pluripotent stem cell),缩写名来源于各个英文单词的首字母。
胚胎ips的获取,不可避免的要严重的伤害乃至杀1死胚胎,这在很多国家已经是法律上的杀1人罪行了。所以,胚胎ips的相关研究在各国都受到严格监管,实质上陷于停顿,而ips细胞就不存在这样的伦1理问题,无需受精卵或胚胎,仅仅是提取一些体细胞,就可以将其转化为与胚胎ips相同的多能细胞,可谓是巨大的进步了。
动物细胞培养
高速冷冻离心机在所有的细胞离体培养中,困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。
⑴血1清:动物细胞离体培养常常需要血1清。相对常用的是小牛血1清。血1清提供生长必需因子,如激1素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里,血1清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。
⑵支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃,塑料等作为支持物。
⑶气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节,不断维持所需要的气体条件。
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