快切酶-友名生物(在线咨询)

限制性内切酶已有百余种，每种酶有其特定的核苷酸序列识别特异性，酶的活性需mg 2来激1活。不同的酶也有许多差别：有些酶除需mg 2外，还需atp 等其他辅助因子的激1活;切割位点和识别序列间的距离不同;有的内切酶同时具有甲1基化作用。根据这些差别，可将限制性内切酶分为i、ii 和iii 种类型。ii 型限制性内切酶只需要二价镁离子的激1活，酶在其识别序列内切割双链dna，产生的各种dna部分片段具有相同的末端结构，而且大多数的ii 型酶可提供粘性未端，有利于片段再连接，大部分ii 型酶所识别的序列具有反向对称的结构，或称之回文结构。如ecori 和hindiii 的识别和切口分别为：
ecori ： g ↓aatt c hindiii ： a↓agct t
t tcga↑ a c ttaa↑g
非特异性内切酶鉴定
为鉴定非特异性内切酶污染，限制性内切酶与缺少该酶识别序列的超螺旋dna底物温育。对于rf i型dna(超螺旋形式)，快切酶，一个单一的非特异性缺口就会将它转变成rf ii型dna(带缺口环状)。小份的限制性内切酶与1μgdna在50μl反应体系中，采用推荐的nebuffer，在推荐的温度下温育4小时。两种形式的dna在琼脂糖凝胶上很容易区分，可以计算出从rf i 到 rf ii的转化率。
限制性酶切分析法
限制性酶切分析法是指*组或一段核酸用限制性内切酶消化产生的片段经电泳等方法分离形成特别的条带图谱，对dna序列的特征进行的分析。限制性酶是生物体内能识别并切割特异的双链dna序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的dna切断的酶，即能够限制异源dna的*并使之失去活力，但对自己的dna却无损害作用。
限制酶是*工程中所用的重要切割工具。科学家已从原核生物中分离出了许多种限制酶，并且已经商品化，在*工程中广泛使用。根据限制酶切割的特点，可将它们分为两大类：一类是切割部位无特异性的；另一类是可特异性地识别核苷酸序列，即只能在一定的dna序列上进行切割。
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