思特进-原位杂交技术
杂交液中的阳离子浓度通过静电排斥作用影响了杂交体之间的链稳定性,较高的盐浓度将增加杂交体的稳定性。大于0.4m的na离子浓度,对tm值、双链复性速率的影响不大,但随着na离子浓度的降低,原位杂交技术,将显著影响tm值和双链复性速率。
有2机溶2剂(甲酰胺)的作用是降低dna-dna和dna-rna等双链体的解链温度。通常dna需要在0.1~0.2m na 90~100℃的条件下变性,那么应用于原位杂交,样品必须在65~75℃的条件下进行长时间变性,这将导致样品形态学的*。50%甲酰胺的应用能将杂交温度降至30~45℃。
*葡聚糖具有很强的水合性,高浓度的*葡聚糖会使得核酸分子无法获得周边亲水环境,增加了探针浓度,加快杂交反应速率。
原位杂交;原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交!
使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在*或其他真核细胞中的位置。
以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。
原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽提分离的染色体dna,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(w.d.be*n)和戴维斯(r.w.d*is)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的dna,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体dna上与探针互补顺序所在的位置。对快速检测转化群落中的dna序列或任何一种插入的dna序列,以及动植物的*定位工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)
思特进-原位杂交技术由武汉思特进科技发展有限公司提供。武汉思特进科技发展有限公司是湖北 武汉 ,办公、文教项目合作的见证者,多年来,公司贯彻执行科学管理、*发展、诚实守信的方针,满足客户需求。在思特进*携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈,共创思特进更加美好的未来。