百萤 Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光

一、百萤cell meter 活细胞caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光概述
我们的cell meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞，半胱天冬酶与活性半胱天冬酶共价结合。caspase-1主要参与促炎细胞因子的细胞凋亡过程。已经证明胱天蛋白酶1对肽序列tyr-val-ala-asp（yvad）具有底物选择性。该试剂盒使用fam-yvad-fmk作为半胱天冬酶1活性的荧光指示剂。 fam-yvad-fmk在凋亡细胞中不可逆地结合活化的半胱天冬酶1。一旦与半胱天冬酶1结合，荧光试剂保留在细胞内。结合抑制胱天蛋白酶1但不会阻止细胞凋亡的进行。
有多种参数可用于监测细胞凋亡。这种cell meter 活细胞半胱天冬酶1活性检测试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 1活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1活性，或用于筛选半胱天冬酶1抑制剂。绿色标记试剂fam-yvad-fmk允许通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。
二、百萤cell meter 活细胞caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光参数
ex(nm)
493
em(nm)
517
溶剂
water
存储条件
在-15℃以下保存，避免光照
三、百萤cell meter 活细胞caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光适用仪器
流式细胞仪
ex：
fl1通道
em:
fl1通道
仪器规格：
用于碘化丙啶的fl2通道
荧光显微镜
ex：
fitc通道
em：
fitc通道
通道：
黑色透明
荧光酶标仪
ex：
490nm
em：
525nm
cutoff:
515nm
通道：
黑色透明
四、百萤cell meter 活细胞caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光实验方案
分离细胞的检测方案
概述
用密度为5×105到2×106个细胞/ ml的测试化合物制备细胞
将fam-yvad-fmk以1：150的比例加入到细胞溶液中
在室温下孵育1小时
将细胞沉淀，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞
在ex / em = 490 / 525nm处分析细胞
注：使用前将所有部件在室温下解冻。
操作方法
1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至适于细胞凋亡诱导的密度，但不**过2 x 106个细胞/ ml。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：
1）用2μg/ ml喜树碱处理jurkat细胞3小时。
2）用1μm星形孢菌素处理jurkat细胞3小时。
3）用4μg/ ml喜树碱处理hl-60细胞4小时。
4）用1μm星形孢菌素处理hl-60细胞4小时。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。
2.通过向fam-yvad-fmk（组分a）的小瓶中加入50μldmso制备150x fam-yvad-fmk dmso储备溶液。
3.将150×fam-yvad-fmk dmso储备溶液（来自步骤1）以1：150的比例添加到细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％co 2培养箱中孵育1小时。
注1：对于fam-yvad-fmk标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ ml。 未使用的150x fam-yvad-fmk dmso储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°c。
注2：对于粘附细胞，用0.5mm edta轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用fam-yvad-fmk孵育之前用含xue清的培养基洗涤细胞一次。
注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
4.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1ml洗涤缓冲液（组分b）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1：fam-yvad-fmk是荧光的，因此qing除任何未结合的试剂以xiao除背景非常重要。
注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μl等分试样，用于步骤6。
5.如果需要，用dna染色标记细胞（如用于死细胞的碘化丙锭，或用于细胞核染色的整个群体的hoechst）。
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