极敏型 ECL化学发光底物试剂盒

极敏型 ecl化学发光底物试剂盒
ultra-sensitive enhanced chemiluminescence substrate kit
试剂盒组成：
货号
组份
数量
ecl-f-100
a 液
50ml
b 液
50ml
说明书
1 份
ecl-f-500
a 液
250ml
b 液
250ml
说明书
1 份
储存：建议置于4 ºc避光保存，一年稳定。
一、产品简介：
本试剂盒是化学发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白或核酸，灵敏度高，背景低，检测灵敏度可达低飞克(femtogram)级乃至飞克级以下，适用于检测极痕量蛋白或核酸。发光信号持续时间较长，半小时以后仍可维持75%的发光，便于反复曝光操作。与其他 ecl 化学发光底物相比，可显著减少样本及一抗和二抗的使用量。
二、原理：
极敏型ecl化学发光底物试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（hrp）的抗体、抗原或者核酸。蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以hrp标记的抗体或探针结合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本产品配制的ecl工作液中，室温孵育数分钟，hrp使工作液中的鲁米诺（luminol）氧化并发光，试剂中添加的增强配方可以使这种发光得到极大增强，从而能够检测更低表达量的蛋白质或核酸。此光经x光胶片或者电子装置感光记录下来，可清晰显示蛋白质或核酸条带。
三、产品优点：
低飞克级灵敏度——极高的灵敏度，能快速检测更广泛的蛋白范围，可检测低飞克级乃至飞克以下的蛋白量。
信号稳定——发光时间较长，能进行多次曝光，半小时以后仍可维持75%的发光。
信号强——发光信号比对碘苯酚增强的 hrp-鲁米诺检测体系得到极大增强。
稳定性较高——试剂盒可在4度稳定存放一年。
节约抗体——需要更少（稀释更多）的一抗和二抗，特别节省抗体(建议用量：一抗0.01-0.2 μg/ml，二抗2-10 ng/ml)。
四、使用方法：
1. 印迹膜制备：执行常规电泳、转膜、hrp标记的抗体或者hrp标记的核酸探针孵育、洗膜；ecl工作液含有hrp催化的发光底物，检测系统必须基于hrp酶标记的抗体或者核酸探针。充分的洗涤对于降低背景非常重要，所有步骤均在室温下完成。
2. ecl工作液的配置：在使用前取等量a液和b液，充分混匀后尽快使用；将膜片置混合液中，于室温下孵育约2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片，注意不要在膜片表面形成气泡。
3.蛋白或核酸信号显现：
1). 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂，仅留下少量液体覆盖表面，不可让膜完全干燥；
2). 将膜片置于保鲜膜上，吸附蛋白面朝上，小心赶尽气泡；
3). 用电子装置感光，或在暗室中用x光片曝光；
4). 根据信号强弱适当调整曝光时间，也可选择不同时间多次曝光，以取得更佳效果。
五、安全性：
无特殊毒性，按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触，请立刻用大量清水冲洗。
六、注意事项：
1．由于不同品牌的抗体质量不同，以及抗体的保存条件和保存时间的不同，初次使用时建议对抗体用量进行优化，以取得更优效果。
2．勿将ecl化学发光底物试剂盒暴露在阳光或强光下，否则易导致其失活；建议保存在棕色瓶中，并避免长时间暴露在阳光下，实验室光照对试剂盒影响不大；除了x光胶片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作。
3．使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜，以确保印迹膜处于湿润状态；使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生。
4．使用前配制ecl工作液，体积足够覆盖膜片即可；取a液和b液时一定要用不同的枪头，互相污染可能导致缓慢失活；配制完毕建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低；弃去使用过的混合试剂。
5．印迹膜与ecl工作液孵育后约3 min时发出的荧光更强，随后荧光会随着时间的延长而缓慢减弱，至30 min仍可保持约75%的光信号；蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间；使用过少的ecl工作液不利反应进行，为达节约目的可将膜剪小，但勿降低ecl工作液使用比例。
6．使用生物素/亲和素体系时，避免使用脱脂奶粉作为封闭液，因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素，容易产生非特异性信号。
7. 避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8. 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，建议使用塑料的平头镊子。