MRC5细胞系人胚肺细胞

一、细胞基本属性
细胞名称 人胚肺细胞
细胞别称 mrc-5; mrc5; mrc 5; mrcv; mrc-v; medical research council cell strain-5
细胞货号 snl-018
细胞种属 人
生长情况 贴壁
培养条件 h-dmem+10%fbs+1%双抗
培养环境 air, 95%; carbon dioxide (co2), 5%
二、细胞培养操作
换液周期 2-3天
培养基体积 t25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
传代比例 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
传代方法 1.尽量吸干净t25瓶原培养基；
2.加3-4ml 常温pbs轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的pbs；
3.t25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；
4.将培养瓶放入37度培养箱消化；
5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；
6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；
7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；
8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
注意事项 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间
消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
三、细胞冻存操作
冻存液配方 92%fbs+8%dmso(新手建议)或92%完全培养基+8%dmso(高手建议);
冻存规格 200-300万/ml，1ml每管
冻存方法 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存
注意事项 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案