NIT-1细胞的培养方法

一.细胞简介：
细胞名称：nit-1/小鼠胰岛素瘤β细胞
智立编码：20211259101371674
组织来源胰腺/朗格汉斯胰岛
生长特性贴壁细胞
细胞形态上皮细胞样
生物安全等级2
生长培养基ham'sf-12k＋10%fbs＋1%p/s
传代比例1:2-1:3
换液频率2~3次/周
冻存条件
冻存液：55%基础培养基+40%fbs+5%dmso
温度：液氮
二.　培养条件
气相：空气，95%；co2，5%
温度：37℃
保藏机构atcc;crl-2055
培养条件：37℃，5%co2，90%rpmi-1640+10%fbs。
三.　复苏步骤：
1.新制100mm平皿1个，含12ml上述培养液；
2.冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏；
3.用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀；
4.放入（37℃，5%co2）培养箱中，过夜换液，2-4天长满。
传代/冻存：将旧培养液吸除，pbs清洗两遍后，加入2ml（/100mm皿/t25瓶）胰酶（0.25%trypsin+0.02%edta），在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，吸除大部分胰酶，留约0.5ml，移至培养箱消化，约1min取出。
1.传代：6ml培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可1:3传代；
2.冻存：3ml冻存液（50%基础培养基+40%fbs+10%dmso）终止消化，吹打均匀，分为3支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。
四.　注意事项：
1.收货当天发现异常，请在24小时内及时联系客服，逾期视为收货良好；
2.冻存管形式，收货后及时置于-80℃冰箱保存，若长时间不使用，应过夜转移至液氮保藏；
3.t25形式，收货后先培养瓶原装置于培养箱静养4h，然后再对细胞进行常规操作。
4.复苏时每管一次用完不得留存，复苏后传一代，即可正常使用。请严格按照本说明操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。