蛋白质折叠*盒-友名生物技术

蛋白质二硫键异构酶
分泌蛋白需要通过在分子内或分子间形成二硫键，从而形成其天然构象。蛋白二硫键异构酶，蛋白质折叠*盒，可以催化这些二硫键的形成和异构化。pdi一方面可以通过二硫键异构酶活性促进蛋白内或蛋白间形成正确的二硫键，另一方面也可以催化某些蛋白的二硫键的水解。
在肽链分部快速折叠成蛋白质过程中，*半胱氨酸之间形成错误位置的二硫键的酶。
目前，传统的获得多*转基yin植株的方法包括共转化，再转化w及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个*的转化效率是不可控的，每个*在目标*组的插入位置也是不一样的，而*分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化w及杂 交都是耗时的过程。
而为了克服运些缺点，具有单个或者多个转录盒子的多*载体应运而生并成功 应用于多个研究，但是运些多*表达载体的应用没有得到广泛的推广应用。因为大部分 的方法需要亚克1隆w至于克1隆所耗时间拉长;没有标签或者报告*与目标*相连，运 样就导致蛋白或者*的鉴定比较困难；另外，某些方法如采用同尾酶构建多*载体的方法受限于可用的酶的数量不多运个问题。所w构建多*载体需要根据研究目的而设计。
无细胞系统是利用细胞提取物（而不是细胞）进行*转录和翻译的系统。一个无细胞*表达系统主要包括三个部分：细胞提取物，反应混合液，以及核酸模板
1.细胞提取物：从细胞中提取的物质，主要包含核糖体、rna聚合酶、其他转录和翻译蛋白（比如σ因子、起始因子和延伸因子），以及用于能量代谢的酶和辅因子。在有些菌株的提取物中，可能*了蛋白酶和核酸酶的活性。
2.反应混合液：包含蛋白质合成所需的一些原料，如氨基酸、核苷酸、盐离子（如铵盐、镁、钾）、能源（糖类、*肌酸等）、拥挤*（crowding agents）、代谢辅因子（辅酶a、nad）、缓冲液、trna以及其他代谢添加剂等。
3.核酸模板：可以是质粒dna或pcr产物线装dna，浓度通常在1-20 nm。
无细胞系统一般的反应体积为10微升，但是根据其实际应用，反应体系可以从10^(-15)到10^3变化。在开始反应时，将三种组分在16-37℃下孵育，蛋白质合成将在1-24h内进行。
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