Ran kit-武汉纽斯特生物技术(图)

当前没有直接测定法来测量arl1 gtpases的激l活。
neweast biosciences arl1激l活检测*盒基于特定于配置的单克l隆*l体，该*l体特异性识别arl1-gtp，但不能识别arl1-gdp。 鉴于单克l隆*l体对其*原的高度亲和力，可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果，并具有一致的可重复性。
arf样蛋白1（arl1）是gtpases的ras超家族中的调控性gtpases arf家族的成员，并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源*。 arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。 arl1在主要序列，细胞定位和功能（膜运输调节）上与arf1-6较相似，ran kit，甚至共享几个共同的结合伴侣。 除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中，还有报道表明arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。
arf6激l活测定。 经gdp（lane1）或gtpγs（lane 2）处理后，纯化的arf6蛋白被免l疫沉淀。 用*活性arf6单克l隆*l体进行免l疫沉淀。
*准备
?1x测定/裂解缓冲液：短暂混合5x储备液，并在去离子水中稀释至1x。 在使用前，添加蛋白酶*l剂，例如1 mm pmsf，10 μg / ml亮肽素和10 μg / ml抑肽酶。
1.将细胞（一块10厘米长的平板，约107个细胞）培养至约80-90％汇合。根据需要用活化剂或*l剂刺激细胞。
2.吸出培养基，并用冰冷的pbs洗涤两次。
3.完全除去pbs洗涤液，然后向细胞中加入冰冷的1x分析/裂解缓冲液（每10 cm组织培养板0.5-1 ml）。
4.将培养板放在冰上10-20分钟。
5.用刮板将其从平板上取下。
6.将裂解物转移至适当大小的试管中，并置于冰上。
7.如果发生核裂解，则细胞裂解液可能变得非常粘稠，难以移液。如果发生这种情况，可将裂解液通过27?号注l射器针头3-4次以剪切*组dna。
8.通过离心10分钟（在4°c下为12，000 x g）清除裂解物。
9.收集上清液并将样品（约1-2 mg的总蛋白）存储在冰上以立即使用，或速冻并存储在-70°c以便将来使用。
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