Taq酶-武汉友名生物公司(图)
随机引物扩增技术(arbitrary primedpcr, ap- pcr)
ap-pcr技术通过随意设计或选择一个非特异性引物.在pcr反应体系中.首先在不严格条件下使引物与模板中许多序列通过错配而复性。如果在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在,则可经taq酶的作用使引物延伸而发生dna部分片段的扩增。经一至数轮不严格条件下的pcr循环后,再于严格条件下进行扩增。扩增的产物经dna测序凝胶电泳分离后.经放1射性自显影或荧光显示即可得到dna*图。ap-pcr用于肿1瘤的**、**的分离;菌1种、菌株及不同物种的鉴定;遗传作图;不同分化程度或某些不同状态下的组织的*表达差异等方面的研究。
pcr反应特异性强:pcr反应的特异性决定因素为:①引物与模板dna特异正确的结合;②碱基配对原则;③taq dna聚合酶合成反应的忠实性;④靶*的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及taqdna聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶*片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶*区,其特异性程度就更高。
*分型
pcr可用于检测特定细胞或生物体中等位*的序列差异。例如,taq酶,*敲除和敲入小鼠等生物的*分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼,可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异。
但是如果为了检测特定核苷酸突变,则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如, pcr扩增子测序就是研究单核苷酸变异(snvs)和单核苷酸多态性(snp)的方法之一。强烈推荐使用高保真dna聚合酶,以防止在pcr过程中引入多余的突变。
通过pcr进行*分型也是对*1症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。
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