PCR 缓冲液-友名生物公司

hot start pcr的原理
hot start pcr法是提高pcr特异性的重要方法之一。这种方法可以防止在pcr反应第yi步骤因引物的错配或引物二聚体的形成而导致的非特异性扩增，从而可以提高目的dna部分片段的扩增效率。takara taq hot start version，takara ex taq hot start version，takara la taq hot start version，primestar hs dna polymerase，mightyamp dna polymerase是*1体和dna聚合酶的混合制品。*1体在高温加热前与聚合酶相结合，*聚合酶的活性。在pcr反应*初的dna变性步骤，*1体变性，聚合酶活性恢复。
pcr扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是mg2 离子浓度过高、退火温度过低，pcr 缓冲液，及pcr循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引 物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。
随机引物扩增技术(arbitrary primedpcr， ap- pcr)
ap-pcr技术通过随意设计或选择一个非特异性引物.在pcr反应体系中.首先在不严格条件下使引物与模板中许多序列通过错配而复性。如果在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在，则可经taq酶的作用使引物延伸而发生dna部分片段的扩增。经一至数轮不严格条件下的pcr循环后，再于严格条件下进行扩增。扩增的产物经dna测序凝胶电泳分离后.经放1射性自显影或荧光显示即可得到dna*图。ap-pcr用于肿1瘤的**、**的分离;菌1种、菌株及不同物种的鉴定;遗传作图;不同分化程度或某些不同状态下的组织的*表达差异等方面的研究。
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