快切酶-友名生物公司

dna限制性内切酶酶切是一项基于dna限制性内切酶的*工程技术，其基本原理是利用限制性内切酶对dna上特定序列的识别，来确定切割位点并实现切割，从而获得所需的特定序列。
生物体内能识别并切割特异的双链dna序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的dna切断的酶，即能够限制异源dna的*并使之失去活力，但对自己的dna却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在dna分子内部进行的，故名限制性内切酶（简称限制酶）。
限制酶作为酶类，诀定其催化作用具有高1效性、专一性和作用条件温和等特点。其中专一性的具体表现为:某种限制酶只能催化dna上特定序列特定位点的*二脂键水解，结果是使dna分子被分割成不同的dna部分片段。限制酶所识别的双链dna上的序列具有“回文对称”性质，即无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，中心轴线两侧的双链dna上的碱基是反向对称重复排列的。当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将dna的两条链分别切开时，即错位平切，产生的是黏性末端;当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，快切酶，即平切，产生平末端。错位切的限制酶在*工程中比较会常使用到，因为与平末端相比较，黏性末端更有利于dna部分片段的连接。
dna部分片段的连接
dna部分片段通过用每一种限制性内切酶过量消化底物dna而获得。这些片段随后用t4 dna连接酶连接( 5′末端浓度为0.1-1.0 μm)。连接的片段然后用同一种限制性内切酶重切。仅当3′和 5′末端都保留完整，连接反应才会发生;而且只有那些识别位点完全恢复的分子才能被重切。切割后正常的带型说明3′和 5′末端都是完整的，而且准备的酶样品中检测不到核酸外切酶和*酶。
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