武汉友名生物(多图)-定量反转录*盒
pcr反应特点
灵敏度高:pcr产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶1细胞;在病毒的检测中,pcr的灵敏度可达3个rfu(空斑形成单位);在*学中*小检出率为3个*。
简便、快速:pcr反应用耐高温的taq dna聚合酶,一次性地将反应液加好后,定量反转录*盒,即在dna扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放1射性污染、易推广。
纯度要求低:不需要分离病毒或*及培养细胞,dna 粗制品及rna均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等dna扩增检测。
聚合酶链式反应(pcr)是一种用于放大扩增特定的dna部分片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊dna copy,pcr的*大特点是能将微量的dna大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶1杀案中凶1手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的dna,就能用pcr加以放大,进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易dna扩增法,意味着pcr技术的*诞生。到如今2013年,pcr已发展到第三代技术。1976年,中国科学家钱嘉韵,发现了稳定的taq dna聚合酶,为pcr技术发展也做出了基础性贡献。
pcr的创建
khorana (1971)等*早提出核酸体外扩增的设想:“经dna变性,与合适的引物杂交,用dna聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可合成trna*。”但由于当时*序列分析方法尚未成熟,热稳定dna聚合酶尚未报道以及引物合成的困难,这种想法似乎没有实际意义。加上分子克1隆技术的出现提供了一种克1隆和扩增*的途径,所以khorana的设想被人们遗忘了。
1983年4月的一个星期五晚上,他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法。
1983年12月,mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的第yi个pcr片段;
1985年,kary mullis在cetus公司工作期间,发明了pcr。mullis要合成dna引物来进行测序工作,却常为没有足够多的模板dna而烦恼。
1985年10月25日申请了pcr的专1利,
1987年7月28日批准(专1利号4,683,202 ),mullis是第yi个发明人;
1985年12月20日在science杂志上发表了第yi篇pcr的学术论1文,mullis是共同作者;
1986年5月,mullis在冷泉港实验室做专题报告,全世界从此开始学习pcr的方法。
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