武汉思特进(多图)-荧光原位杂交

惰性多聚体可用来促进250个碱基以上的探针的杂交率。对单链探针可增加3倍,荧光原位杂交,而对双链探针、随机剪切或随机引物标记的探针可增加高达100倍。而短探针不需用促进剂,因其复杂度低和分子量小 ,短探针本身的杂交率就高 。*葡聚糖是一种广泛用于较长双链探针杂交的促进剂。这是一种多聚胺,平均分子量为500 000。另一种常见的促进剂是聚乙二醇(peg),peg分子量小(6000~8000)、粘度低、价格低廉,但它不能完成取代*葡聚糖。在某些条件下5%~10%*葡聚糖效果较好,若用5%~10%peg则可产生很高的本底。因此,使用促进剂时有必要优化条件。
原位杂交试验
收集斑马鱼的胚胎,在holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%*固定,在4℃保存,二十四小时后用50%甲6醇2%*溶液洗,然后换成甲9醇,在-20c 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精0准确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。
使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在*或其他真核细胞中的位置。
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