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低温生物知多少?
实验室的传代保藏过程
1. 按说明书要求复溶菌粉,转种于适当的增菌培养基内(g1),复壮后转接至平板上,并于适当温度下培养适当时间,分离出单个纯种菌落,此为第2代(g2)。
2. 鉴定完成后,挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管,同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时,保藏为第2代,但工作用则为第三代。
3. 将第2代管冷冻保存,将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的g2代转种于平板和斜面培养基上,平板上的制成冷冻保藏管第三代(g3),斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用(w3)。
5. 将第三代(g3)冷冻或低温保存,将生长、转种后的g2经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用代数小于5时,低温生物*,可直接用上一代工作用转接下一代工作用,低温生物*厂家,如w3可直接转接为w4。
7. 按上述程序操作,直至g4转为w5为止,需重新开启安瓿,再重复上述操作程序、保藏和使用。
以上方法中,被分为两类。传代用和工作用,传代用用于甘油冷冻管法保藏,工作用用斜面低温保藏法保藏。
实验证明,甘油冷冻管的有效期至少为2年,但其主要适用于*(需氧)、酵母菌的传代、保藏、*和芽孢类*则需应用其它方法。
低温生物*的保存方法
低温保存法
①简单保存法,将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1~2个月,若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3~4个月;
②液氮超低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种*、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法长期保存。
低温生物*——*分离方法
寄主分离法即从生长有某种*的寄主体上(如茯苓、木耳木段)取下木片,低温生物*报价,进行分离的方法。如木耳制种时,可选朵大、出耳多、质厚的耳棒(即长有木耳的木段)。采集后,削去耳根下的树皮,将其横断面锯成1 厘米厚的木片,在无菌条件下,切去无耳菌丝部分,低温生物*哪家好,留下有耳菌丝部分,浸入水中1 分钟,取出再用无菌水冲去木片上的液体。然后,用解剖刀将木片切成0 . 5 厘米的小块,放入斜面培养基内,置24 ~26 ℃下培养,及时淘汰杂菌,选取纯菌丝进行移植培养,即得*。
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