友名生物公司-湖北腺病毒浓缩
腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、*内重组、位点特异性重组4个发展阶段,同时随着分子生物学技术的发展,改进的体外连接法又得到应用。
体外连接法。这种方法需要全长腺病毒*组和一个含腺病毒*组左末端序列的质粒,包括左端反向末端重复(inverted terminal repeat,itr)、包装信号和e1a的增强子序列。将目的*克1隆到质粒的病毒序列下游,clai酶切获得含目的*的*组左末端,连接到clai酶解的野1生型腺病毒*组(clai在病毒*组仅有一个酶切位点,位于e1a*内部),将得到的含目的*的的*组dna直接转染包装细胞293,产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒*组,能够使用的酶切位点仅有一个,连接效率低,而且仅删除了部分e1a*,外源*载量有限,所以现已淘汰不用。
植物的遗传转化是以植物器1官、组织、细胞或原生质体作为受体,通过某种技术或途径转入外源*,获得外源*稳定表达的可育植株。遗传转化可以打*物种界限,有目的地实现物种之间或物种内部遗传物质的交流,为植物的遗传改良开辟了一条新的途径。
植物遗传转化方法就是通过特定的方式将外源*导入到受体细胞内,使之发生定向的遗传变异。目前,已经建立了多种转化系统。对于大多数遗传转化系统而言,遗传转化方法是遗传转化系统的关键环节,决定着转化的成败及效率。用于植物的遗传转化方法有许多:农杆1菌介导法、*枪法和peg法等。
在转*植物中,腺病毒浓缩,用农杆1菌介导法获得的转*植物占80%,但大多集中在双子叶植物上。自从*枪问世以后,单子叶植物中的禾谷类作物的遗传转化获得了迅速发展。农杆1菌介导法和*枪法已成为目前用于遗传转化的主要方法。
农bacillus转化法
农bacillus包括引起植物冠瘿瘤的根*农bacillus和引起发根病的发根农杆1菌。根*农杆1菌和发根农bacillus有相似的遗传背景。在农bacillus介导的转化中,80%左右是由根*农bacillus介导的,大约20%是由发根农bacillus介导的。这里主要介绍根*农杆1菌介导的转化。
根*农bacillusti质粒上有一段转移dna(t-dna)和vir区,在农bacillus侵染植物时,这段t-dna可以插入到植物*组中,使其携带的*在植物中得以表达。vir区共24个*,它们表达的蛋白与t-dna的加工和转移有关。
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