百萤 Helixyte? iFluor 350 核酸标记染料?实验方案

一.百萤 helixytetmifluor 350概述
helixyte™ ifluor 350 核酸标记染料是我们 helixyte 核酸标记和缀合技术的关键成员之一。由于核酸分子中缺乏反应性部分，标签/半抗原与核酸的标记/缀合一直非常具有挑战性。胸腺嘧啶和鸟苷经常被探索用于核酸缀合，例如光交联（通过补骨脂素与胸腺嘧啶）或鸟苷的化/尤氏标记。然而，这些现有的缀合要么繁琐，要么需要严格的条件且产量低，因此不适合常规实验室使用。在类似条件下，我们的 helixyte 核酸标记和缀合技术易于使用，产量高。 helixyte™ ifluor 350 核酸标记染料提供了一种特的方法，通过简单的混合步骤将 ifluor 350 荧光团附着到核酸上。标记试剂很容易与鸟呤的n7反应形成稳定的共价键。贴标过程简单、快速、产量高。标记的核酸与未反应的染料的分离可以通过简单的乙醇沉淀、旋转柱或透析来完成。由此产生的标记 dna/rna 探针具有明亮的蓝色荧光，可以使用 amca/alexa fluor 350 滤光片组轻松检测到。它们可用于斑点、northern 和 southern 印迹、rna 和 dna 原位杂交、多色荧光原位杂交 (mfish)、比较基因组杂交 (cgh) 或微阵列分析等。
二.百萤 helixytetmifluor 350参数
ex(nm)
345
em(nm)
450
分子量
n/a
溶剂
dmso
存储条件
在-15℃以下保存，避免光照
三.百萤 helixytetmifluor 350实验方案
样品分析方案
概述
将 dna 与 helixyte™ ifluor 350 核酸标记染料储备溶液混合
37°c 孵育 1 小时
根据下游应用的需要进行纯化。
溶液配制
除非另有说明，所有未使用的储备溶液应分成一次性等份，并在制备后储存在-20°c。避免反复冻融循环
打开小瓶之前，请在室温下解冻 helixyte™ ifluor 核酸标记染料。短暂离心以收集干燥的沉淀
制备 helixyte™ ifluor 核酸染料储备溶液
1.将 110 μl dmso 添加到 helixyte™ ifluor 350 核酸标记染料小瓶中，制备 10 mm 储备溶液。
注意：建议将任何未使用的储备溶液分成一次性等份。将等分试样储存在 ≤-20 ℃ 下并避光。避免反复冻融循环。
操作步骤
1.根据下表1中的信息准备标记反应。
表 1. 标准核酸标记反应。
组分
添加到反应中的体积
终浓度
dna (1 mg/ml)
2 to 5 µl
2 to 5 µg
helixyte™ ifluor 350 核酸标记染料储备液
0.5 µl
50 µm
te 缓冲液（ph 8 至 8.5）
添加足够的缓冲液以将体积调整至 100 µl
注意：此 dna:染料比例可产生适合大多数应用的标记效率。可根据应用要求调整 helixyte™ ifluor 350 核酸标记染料的量或反应孵育时间，以修改标记密度。优化 dna 与染料的比例以获得高的标记率
2.避光、37℃孵育反应1小时。
注意：孵育 30 分钟后，短暂离心反应，以尽量减少蒸发的影响并保持反应组分适当的浓度。
注意：或者，反应可以在室温下孵育 2 小时。为了获得的标记条件，我们建议在 37℃ 下孵育。
3.孵育后，可以纯化标记混合物以去除任何游离的标记染料。有关说明，请参阅下面的“用酒精沉淀纯化标签混合物”部分
用酒精沉淀纯化标签混合物
1.将 0.1 体积 (10 ul) 5m 氯化钠和 2 - 2.5 体积冰冷的 ** 乙醇 (250 ul) 添加到反应中。充分混合并在 ≤ -20°c 下放置至少 30 分钟。
2.在冷冻微量离心机中全速 (>14,000 x g) 离心 15-30 分钟，沉淀标记的核酸。沉淀后，用微量移液器小心地除去乙醇。不要打扰颗粒。
注意：少量核酸可能难以看到。在微量离心机中标记并定向含有沉淀物的管，以便沉淀将在预定位置形成。
3.用 500 μl 室温 70% 乙醇清洗沉淀一次。再全速离心 15-30 分钟。
4.用微量移液器除去所有乙醇痕迹。不要让样品干燥过 5 分钟，因为沉淀可能会变得难以重新悬浮。
5.用约 30 µl 无菌水重悬标记的 dna。
6.储存纯化的、标记的核酸以供长期保存或置于冰上以便立即使用。
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