Taq酶-友名生物公司

竞争性pcr(competitive pcr， c-pcr技术
c-pcr技术是竞争cdna模板与目的cdna同时扩增.使用同样的引物，但一经扩增后。能从这些目的cdna区别开来。通常使用突变性竞争cdna模板.其序列与目的cdna序列相同.不过模板中仅有一个新内切位点或缺少内切位点突变性的cdna模板可用适当的内切酶水解，并用分光计测定其浓度。cdna目的序列和竞争模板相对应的含量.可用澳化乙锭染色.电泳胶直接扫描进行测定或掺入放1射性同位素标记的方法测定。竞争模板开始时的浓度是已知的.则cdna目的序列的*初浓度就能测定。这种方法能准确测定mrna中cdna靶序列.可用于几个到10个细胞中mrna的定量。
复合pcr(multiplex pcr)技术
在同一反应中用多组引物同时扩增几种*片段.如果*的某一区段有缺失则相应的电泳谱上这一区带就会消失。复合pcr主要用于同一病原体的分型及同时检测多种病原体、多个点突变的分子病的诊断。
重组pcr技术
重组pcr技术是在两个pcr扩增体系中，两对引物分别由其中之一在其5°-端和3-端引物上带.上一段互补的序列混合两种pcr扩增产物.经变性和复性。两组pcr产物互补序列发生粘连。其中一条重组杂合链能在pcr条件下发生聚合延伸反应，产生一个包含两个不同*的杂合*。
巢式pcr(nest pcr枝术.
先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量.然后再用一对内引物扩增以得到特异的pcr带。此为巢式pcr。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式pcr。为减少 巢式pcr的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些，taq酶，且用量较少。同时在第yi次pcr时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度。这样在第yi次pcr时，由于较高退火温度下内引物不能与模板结合，故只有外引物扩增产物，经过若干次循环。待外引物基本消耗尽，无需取出第yi次pcr产物，只需降低退火即可直接进行pcr扩增。这不仅减少操作步骤。同时也降低了交叉污染的机会。这种pcr称中途进退式pcr( drop-in， drop-out pcr)上述三种方法主要用于少量dna模板的扩增。
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