肉类DNA提取-武汉友名生物公司

elisa定量测定
elisa操作步骤复杂，影响反应因素较多，肉类dna提取，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法elisa，标准曲线的范围一般较宽，曲线*高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈s形，其头、尾部曲线趋于平坦，*较呈直线的部分是相对理想的检测区域。
测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因*盒所用模式的差别而略有不同。elisa测定的标准曲线注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。
适用于ｐｃｒ研究的快速提取法：
1 田间剪取植株新鲜叶片5-10ｍｇ(约2ｃｍ长)左右，新鲜叶片放于1 5ｍｌ离心管中，存于冰盒中，根据样品号贴上相应的标签。
2 用剪刀将叶片组织剪细(约0 5ｃｍ长)放在点穴式研板中。
3 加入400μｌｄｎａ提取缓冲液，用玻棒将叶组织研细，直到液体变成深绿色即可。
4 再加400μｌｄｎａ提取缓冲液，混合均匀，转入一新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。
5 加400μｌ氯1仿，混合均匀后，2400×ｇ离心30ｓ，将上清液转入一支新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。
6 加800μｌ无水乙醇，混匀，2400×ｇ离心3ｍｉｎ。弃上清。
7 70%乙醇冲洗，风干。
8 用50μｌｔｅ缓冲液溶解，存于-20℃。
9 取1μｌ用于ｐｃｒ分析。
dna提取过程中各种*的作用及原理
溶液ii-naoh-sds液：naoh：核酸在ph大于5，小于9的溶液中，是稳定的。但当phgt;12或phlt;3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。 在溶液ii中的naoh浓度为0.2mo1/l，加抽提液时，该系统的ph就高达12.6， 因而促使染色体dna与质粒dna的变性。
sds：
sds是离子型表面活性剂。它主要功能有：
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而*细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)sds能与蛋白质结合成为r-o-so3-…r -蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。 但是sds能*核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中 (用rnase去除rna时)受到干扰。
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