西安细胞-英瀚斯生物科技公司-293t细胞
细胞培养中常见的污染及解决方法
原生动物污染
原生动物污染后,细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下,大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长,但繁殖速度减慢,细胞生长状态不好,西安细胞,边缘不清,变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时,单细胞测序,原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍,293t细胞,但以细胞为主,因为原生动物的数量相对较少,因而对细胞的正常生长没有影响,只有当它们达到一定数量时,才终爆发成为循环。
解决方法:原生动物污染的原因有很多,如液体消毒问题、操作问题、环境问题等,如果细胞足够,果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留,需要购买使用相关的灭菌*。
透射电镜自噬小体检测
胰酶消化,收集作用后的细胞,离心,先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的pbs溶液中保存在4c中过夜。
再用乙醇梯度脱水,接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定,后用*醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色。通过tem分析凋亡细胞内超微结构变化,拍照保存。
贴壁细胞:先倒出培养液,采用胰蛋白酶消化或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心,100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。管底的细胞团不要打散, 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液,固定约1h-2h. 也可在4c冰箱过夜。
干细bao培养诱导分化
干细bao是一类具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞,理论上具有分裂能力,在特定条件下,可分化成特定组织。通常改变* es 细胞不分化状态的培养条件, es 细胞就可以分化成多种细胞类型。es 细胞具有的这种能力在体外增殖并保持未分化状态及其多向分化潜能的生物学特性,使其广泛应用于生物学研究的各个领域, 它的潜在医学应用价值已成为世界范围内研究的热点。目前,已报道的自es细胞诱导分化的细胞主要包括胰岛细胞、*细胞、肝细胞、*细胞、脂肪细胞、心肌细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软gu细胞和黑素细胞等。
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